重组质粒pYTA/Aβ-HBcAg的构建及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的: 研究β-淀粉样肽(Aβ)与HBcAg的融合基因Aβ-HBcAg的原核表达, 并检测表达的融合蛋白Aβ-HBcAg的免疫原性. 方法: 从重组质粒7Z/Aβ-HBcAg中, 切下含Aβ-HBcAg的基因片段, 将其融合于质粒pYTA1的lac启动子之后, 构建重组表达质粒pYTA/Aβ-HBcAg.以此重组质粒转化大肠杆菌DH5α, 在IPTG诱导下表达.超声破碎表达的细菌, 通过SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色, 检测融合蛋白Aβ-HBcAg的表达.采用ELISA法检测融合蛋白的反应原性. 融合蛋白经饱和硫酸铵盐析法分离和纯化后免疫BALB/c小鼠, 用ELISA法检测血清中抗-Aβ抗体的滴度.结果: 融合蛋白以可溶性形式存在于细菌裂解液的上清中, 其表达量为菌体总蛋白量的7% .表达的融合蛋白既有Aβ的反应原性, 又有与HBcAg的反应原性.经3次免疫后, BALB/c小鼠血清中抗-Aβ抗体的滴度最高可达为1∶ 16 000.结论: 融合基因Aβ-HBcAg可在大肠杆菌DH5α中表达. 表达产物为可溶性蛋白, 存在于细菌裂解液的上清中, 具有较强的免疫原性.本研究为正在进行的AD基因工程疫苗的动物实验打下了基础.

关键词：阿尔茨海默病、β-淀粉样肽、HBcAg、免疫原性、疫苗

所属期刊栏目：20

分类号：R749.1;R392(神经病学与精神病学)

资助基金：陕西省自然科学基金2001SM57;西安交通大学校科研和教改项目2002003

在线出版日期：2004-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：671-674