人PD-L1 cDNA的克隆及其胞外区蛋白在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的: 克隆人PD-L1基因的cDNA并构建PD-L1胞外区基因的原核表达载体, 在大肠杆菌中进行表达.方法: 以RT-PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中, 扩增并克隆PD-L1的cDNA, 构建PD-L1胞外区基因的原核表达载体, 在大肠杆菌BL21(ED3)中进行表达并鉴定.结果: 克隆到PD-L1 cDNA编码区的全长序列, 经DNA测序证明其与已报道的序列一致.同时构建了在羧基端带有His6标签的PD-L1胞外区基因的原核表达载体, 并在大肠杆菌中表达.免疫印迹分析表明, 在IPTG诱导后表达的PD-L1胞外区蛋白, 相对分子质量(Mr)为25 000, 与理论值的大小相符.该重组蛋白能与抗His6标签的单抗(mAb)特异性反应.结论: 成功地克隆PD-L1基因, 其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达, 为利用PD-L1转基因修饰移植物或以PD-L1重组蛋白抑制移植排斥反应等研究提供了条件.

关键词：PD-L1、cDNA克隆、淋巴细胞、重组蛋白

所属期刊栏目：20

分类号：Q78;R392.12(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30230350;国家重点基础研究发展计划973计划G1999054303和G200057006;广东省科技攻关项目A302020204

在线出版日期：2004-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：659-663