兔抗STAT5抗体的制备及其在乳腺癌诊断中的应用

摘要：

目的:制备并纯化兔抗小鼠脾信号转导和转录激活因子5(STAT5)的抗体,分析其在乳腺癌细胞以及良恶性乳腺组织中的表达.方法:应用重组小鼠STAT5蛋白,常规免疫雄性新西兰兔制备抗STAT5抗体,并用盐析法和离子交换层析技术进行纯化.用免疫印迹法(Western blot)检测抗STAT5抗体的纯度和特异性,以及乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中STAT5蛋白的表达;用免疫组化SP法检测STAT5在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达.结果:以重组小鼠STAT5蛋白免疫新西兰兔6 wk后,用间接ELISA法检测静脉血中STAT5抗体的效价为1:204 800(A450=1.07).将STAT5经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为90 000～95 000的蛋白带,与文献[3]的报道相符.用抗STAT5血清做Western blot分析显示,在Mr为90 000～95 000处也有1条明显的带,证明是抗STAT5的特异性抗体.将人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231的细胞浆和细胞核蛋白,与所制备的抗STAT5抗体均可起反应.人乳腺组织切片用抗STAT5抗体做免疫组化染色显示,在正常乳腺组织细胞浆中可见棕黄色颗粒,而在乳腺癌组织的细胞浆和细胞核中可见棕黄色颗粒.结论:制备了高效价、特异性的兔抗STAT5抗体.用该抗体检测证实,STAT5只在正常乳腺组织的细胞浆中表达,而在乳腺癌细胞STAT5的细胞浆和细胞核中均有表达,提示发生乳腺癌后,STAT5可由细胞浆易位入细胞核中表达,可作为乳腺癌临床诊断的参考指标.

关键词：STAT5、抗体、乳腺癌、细胞系、免疫组化染色、兔

所属期刊栏目：20

分类号：R392.11

在线出版日期：2004-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：615-617,620