人肝再生磷酸酯酶2(PRL-2)的原核表达及其鸡卵黄抗体的制备

摘要：

目的:原核表达人肝再生磷酸酯酶2(PRL-2)与谷胱甘肽S转移酶(GST)和6个串联组氨酸(6×His)的融合蛋白,并制备GST-PRL-2特异性鸡卵黄抗体.方法:将人PRL-2 cDNA的全长蛋白编码序列,克隆入两种原核表达载体pGEX-4T-2和pET21a中,在大肠杆菌BL21中诱导表达融合蛋白.用Glutathione Sepharose 4B和Ni-NTA agarose亲和柱分别纯化目的蛋白.以纯化的GST-PRL-2融合蛋白免疫产蛋母鸡制备多克隆抗体,应用6×His-PRL-2对抗体进行亲和层析纯化,纯化产物用Western blot进行分析.结果:得到高表达量的融合蛋白,经亲和层析柱纯化后获得较高纯度的GST-PRL-2和6×His PRL-2融合蛋白.以GST-PRL-2融合蛋白免疫鸡得到抗PRL-2的多克隆抗体,Western blot证实,经6×His PRL-2亲和层析纯化的抗体,能够识别6×His-PRL-2和GST-PRL-2融合蛋白,但不同GST蛋白起反应,表明具有较高的特异性.结论:利用原核表达的人PRL-2融合蛋白制备的抗PRL-2多克隆抗体具有较好的特异性,为研究PRL-2蛋白在细胞信号转导过程中的作用提供了重要的技术和材料保障.

关键词：肝再生磷酸酯酶2、融合蛋白、亲和层析、鸡卵黄抗体

所属期刊栏目：20

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30100218

在线出版日期：2004-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：578-581