抗人CD3单链抗体/p53四聚功能域融合基因的构建及表达

摘要：

目的: 构建抗人CD3单链抗体(scFv)/p53四聚功能域融合基因, 并进行真核表达及活性测定. 方法: 在已经构建抗人CD3 scFv和人IgG3上游铰链区/p53四聚功能域融合基因基础上, 将抗人CD3 scFv克隆入载体pUC18/IgG3/p53中, 构建抗人CD3 scFv/p53四聚功能域融合基因.经酶切鉴定及序列测定证实后, 将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2-B中, 并转染Hela细胞进行表达.表达产物纯化后, 利用流式细胞仪进行活性测定. 结果: 获得了抗人CD3 scFv/p53四聚功能域融合基因, 基因全长为882 bp, 可编码294个氨基酸, 与已发表的抗人CD3 scFv、人IgG3上游铰链区和人p53四聚功能域基因cDNA序列相一致.表达产物经SDS-PAGE和Western blot证实, 为Mr约35 000的特异蛋白条带.纯化后经流式细胞仪检测, 可特异性地结合人外周血单个核细胞(PBMC), 亲和力高于scFv. 结论: 获得了可与PBMC特异性结合的抗人CD3 scFv四聚体, 为进一步临床应用奠定了基础.

关键词：CD3、单链抗体、p53四聚功能域、融合基因

所属期刊栏目：20

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金39900180

在线出版日期：2004-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：560-562,567