抗HEV中和抗体13D8的单链抗体的构建及表达

摘要：

目的: 降低HEV中和性单抗(mAb)13D8的鼠源性, 表达其单链抗体(scFv).方法: 从分泌13D8鼠mAb的杂交瘤细胞中, 通过RT-PCR克隆mAb的VL、 VH基因, 并进一步组装成VH-linker-VL型的scFv片段.将scFv片段克隆到pTO-T7载体中, 在大肠杆菌中进行表达.用ELISA、 Western blot检测scFv的活性.结果: SDS-PAGE表明, 13D8的scFv在E.coli中得到高效表达, 表达量达菌体总蛋白的26.8%左右, 表达产物主要以包涵体的形式存在.间接ELISA和Western blot检测表明, 表达的13D8的scFv能与HEV OFR2区中一段重组蛋白(NE2)特异结合.竞争ELISA表明, scFv与原鼠mAb识别的为同一表位.结论: 成功地表达出具有免疫学活性的13D8的scFv.

关键词：HEV、单链抗体、原核表达

所属期刊栏目：20

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：福建省科技攻关项目2002F013;国家创新药物博士基金2003AA2Z3539;福建省自然科学基金C0310005

在线出版日期：2004-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：556-559