可溶型人干细胞因子cDNA的克隆表达、复性与纯化

摘要：

目的:构建可溶型人干细胞因子(hSCF)基因的表达载体.优化培养条件,实现hSCF基因在大肠杆菌中的高表达.方法:利用PCR技术,以人淋巴结cDNA为模板扩增并克隆hSCF基因.用简并PCR对hSCF基因5′端的序列进行修饰,以实现在大肠杆菌中的高效表达;用MTY比色法测定初步复性和纯化的hSCF蛋白的生物学活性.结果:扩增并克隆了hSCF成熟肽cDNA.将其插入表达载体pBV220构建了hSCF基因的表达质粒,并在大肠菌中初步表达.表达量占总菌体的20%以上,优化培养条件后表达量可达到40%以上,表达产物为包涵体.将包涵体溶解在8 mol/L脲或7 mol/L盐酸胍中,用疏水色谱法进行复性并同时纯化,得到具有天然生物学活性的rhSCF蛋白.结论:成功地克隆hSCF基因,并实现在原核系统中的高表达,所获表达菌株可用于生产以获得具有生物学活性的rhSCF蛋白产品.

关键词：PCR、人干细胞因子、大肠杆菌包含体、高效疏水色谱、色谱饼、重组蛋白

所属期刊栏目：20

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金29675017;陕西省自然科学基金2003C111

在线出版日期：2004-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：402-405