人IL-1RⅡ基因的克隆及其表达

摘要：

目的:克隆人IL-1RⅡ基因,构建其逆转录病毒载体,以探讨其在IL-1主导疾病中的作用.方法:用RT-PCR法从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人的IL-1RⅡ基因.将其克隆到原核表达质粒PET22b中,构建重组质粒PET22b-IL-IRⅡ.将该重组质粒依次进行PCR、酶切鉴定及测序后,转化BL21菌,以IPTG诱导表达.表达产物用Western blot鉴定.另外,将以酶切重组质粒PET22b-IL-1 RⅡ所获IL-1 RⅡ基因的全长ORF,克隆到逆转录病毒质粒中并转染293细胞,用免疫组化染色法检查IL-1RⅡ基因的表达.结果:用RT-PCR法,从人PBMC中扩增出1 203 bp的cDNA,测序证实为人IL-1RⅡ基因.Western blot表明,重组质粒可表达IL-1RⅡ蛋白.免疫组化染色表明,IL-1RⅡ重组逆转录质粒可在293细胞中高效表达IL-IRⅡ蛋白.结论:成功地克隆了人IL-1RⅡ基因,构建了其原核表达载体和重组逆转录病毒载体,并在BL21菌中表达IL-1RⅡ重组蛋白,为进一步研究IL-1RⅡ基因在相关疾病中的作用创造了有利条件.

关键词：蛋白表达、人IL-1RⅡ基因、基因克隆

所属期刊栏目：20

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏省"135"工程项目苏卫科教[2003]19号

在线出版日期：2004-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：195-198