抗多囊蛋白1氨基端单克隆抗体的制备和鉴定

摘要：

目的:用杂交瘤技术制备抗多囊蛋白1胞外区氨基端的单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定.方法:以肾组织总RNA为模板,用RT-PCR扩增多囊蛋白1胞外区氨基端的编码基因PKD1 cDNA.将该基因克隆到融合蛋白表达载体pQE30中,转染大肠杆菌M15.以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达多囊蛋白1胞外区氨基端的组氨酸融合蛋白(PC1-e2),用亲和层析法纯化.以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株Sp2/0进行细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆,有限稀释法进行单克隆化.mAb的特异性用间接ELISA和Western blot鉴定.结果:克隆到两个编码多囊蛋白1氨基端的cDNA片段(502 bp和471 bp).构建的表达质粒经酶切和DNA测序证实,为所需要的质粒.表达出相对分子质量(Mr)分别为19 800和18 900的融合蛋白,经Western blot鉴定,均为多囊蛋白1的融合蛋白.用Mr为18 900的融合蛋白免疫小鼠,得到杂交瘤细胞株7B1.Western blot分析表明,该细胞株分泌的mAb能特异地与多囊蛋白1氨基端结合.结论:本实验表达了PKD1多拷贝区所编码的PC1-e2,成功地制备了抗多囊蛋白1胞外区N端的mAb.

关键词：常染色体显性多囊肾病、多囊蛋白1、多拷贝区、单克隆抗体

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分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30170901;军队杰出人才基金985006;上海市优秀学科带头人项目97047;上海市重点基础研究项目02JC/4029

在线出版日期：2004-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：186-190