抗人整合素ανβ3单链抗体的构建和表达

摘要：

目的:利用基因工程抗体技术构建抗人整合素ανβ3单链抗体(scFv).方法:从分泌抗人整合素ανβ3单抗(mAb)的杂交瘤细胞E10总RNA中,用RT-PCR扩增VH和VL基因,对其核苷酸序列分析后,通过PCR在VH和VL基因间插入柔性连接子(Gly4Ser)3,组装成scFv基因,并克隆至原核表达载体pTIG-TRX中.以重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导目的基因表达.结果:转化菌可表达相对分子质量(Mr)为31 000的scFv.Western blot证实,具有His6标签蛋白的表达.经低剂量的IPTG诱导和较低温度培养,scFv获得了可溶性形式表达.表达产物经Ni-NTA琼脂糖层析纯化后纯度达91%以上.ELISA鉴定证实,scFv具有良好的抗原结合活性.结论:成功地构建并表达抗人整合素ανβ3的scFv,为进一步临床研究奠定了基础.

关键词：单链抗体、整合素ανβ3、构建、表达

所属期刊栏目：20

分类号：R392.11

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA215361

在线出版日期：2004-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：159-162