CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究

摘要：

目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位.方法:以RT-PCR方法克隆人CTLA4基因,构建CTLA4-EGFP融合蛋白的表达载体.以其转染K562细胞后,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位.结果:从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA.通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码,成功地构建CTLA4-EGFP融合蛋白表达载体.以该质粒转染K562细胞24 h后,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为16%.表达的融合蛋白主要分布于胞内,细胞膜上分布较少.相反,转染空载体的细胞仅表达EGFP,且其在细胞内呈弥散样分布.以佛波醇酯加离子霉素刺激后,CTLA4-EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到29%,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变.结论:成功地构建CTLA4-EGFP融合蛋白表达载体,并在K562细胞中得到表达.表达的融合蛋白与天然CTLA4在活化T细胞中的定位和转运特点相似.

关键词：CTLA4、绿色荧光蛋白、融合蛋白、共聚焦显微术

所属期刊栏目：20

分类号：Q78;R392.12(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30230350;国家重点基础研究发展计划973计划G200057006

在线出版日期：2004-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：135-139