重组人淋巴毒素α缺失体的表达、纯化及鉴定

摘要：

目的:构建重组人淋巴毒素α缺失体(rhLT-αΔN27)的原核表达载体, 在大肠杆菌中进行表达, 建立纯化rhLT-αΔN27的工艺.方法:从Jurkat细胞中提取总RNA, 用RT-PCR扩增rhLT-αΔN27基因, 并插入原核表达载体pET-23b中, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 用IPTG诱导rhLT-αΔN27表达.包涵体经洗涤和复性后, 用DEAE Sepharose FF和Phenyl-Sepharose FF纯化.结果:rhLT-αΔN27以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后, rhLT-αΔN27的纯度达99%, 比活性高于8×107 U/mg.纯化样品的相对分子质量(Mr)、等电点, 以及N端序列等其他理化性质均同预计的结果相符.结论:构建了rhLT-αΔN27的表达载体, 并成功地在大肠杆菌中进行了表达, 建立了rhLT-αΔN27的纯化工艺.

关键词：rhLT-α、表达、纯化、鉴定

所属期刊栏目：20

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：109-112