两种hIL-6/GM-CSF融合蛋白基因的构建、表达及活性比较

摘要：

目的:构建及表达具有hIL-6和hGM-CSF双重生物学活性的hIL-6/GM-CSF融合蛋白分子.方法:应用PCR技术对hIL-6和hGM-CSF的基因分别加以改造, 同时在两者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3, 克隆PCR产物, 并构建成克隆有两种融合蛋白基因的pBV220表达质粒, 两种融合蛋白分别是:IL-6(1～184)-GM-CSF(9～127)(简称IG1)和IL-6(24～184)-GM-CSF(9～127)(简称IG2).将表达质粒分别导入E.coli BL-21中诱导表达.通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化目的蛋白.使用hIL-6依赖细胞株B9和hGM-CSF依赖细胞株TF1, 通过MTT比色法测定融合蛋白的生物学活性.结果:对两种融合蛋白基因的测序结果表明, 其序列与理论设计完全一致.表达质粒在E.coli BL-21中均得到高效表达, 表达的融合蛋白均占总蛋白含量的25%以上, 表达产物以包涵体的形式存在, 通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后, 获得两种目的蛋白, 其纯度均达到95%以上.活性测定结果表明, 两种融合蛋白均具有较高的hIL-6和hGM-CSF的双重生物学活性.结论:获得了具有较高纯度和双重生物学活性的hIL-6/GM-CSF融合蛋白.

关键词：白细胞介素-6、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、融合蛋白、克隆、基因表达

所属期刊栏目：20

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：云南省自然科学基金2001C0031Q

在线出版日期：2004-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：104-108