采用简并引物克隆葎草花粉过敏原全长同源cDNA

摘要：

目的:建立一套稳定可靠的方法, 对过敏原性物种中的过敏原同源基因进行快速克隆.方法:在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上, 设计简并引物, 基于高质量葎草花粉RNA, 逆转录合成cDNA.采用Touchdown方式在cDNA池中进行选择性PCR扩增.同时借助梯度PCR程序, 对引物扩增的简并性作进一步强化, 并结合RACE技术获取全长cDNA, 进而对葎草花粉中的过敏原同源基因进行克隆.结果:成功地获得3个全长cDNA克隆.序列分析显示, 这些基因与已知过敏原的基因序列相似性高达79%～85%, 初步认定其为泛过敏原肌球蛋白抑制蛋白(profilin)的同源基因.对比RACE技术获得的相应基因的全长序列发现, 这些序列在引物结合处与简并引物序列之间存在4个碱基的差异, 提示采用Touchdown方式的梯度PCR程序, 可使引物的简并性得到进一步扩展.结论:简并引物与Touchdown梯度PCR相结合的方法, 能够对以葎草为代表的基因组未曾深入研究的物种中的过敏原同源基因进行有效克隆.

关键词：简并引物、梯度PCR、基因克隆、过敏原、同源基因

所属期刊栏目：20

分类号：R282.71(中药学)

资助基金：广东省自然科学基金034617

在线出版日期：2004-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：99-103