人幽门螺杆菌18 000外膜蛋白与HspA双价疫苗的构建和表达

摘要：

目的:构建含人幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)和Mr为18 000的外膜蛋白编码基因的重组载体, 进行核苷酸序列分析, 并在E.coli BL21中表达.方法:用PCR方法从Hp DNA染色体中, 扩增HspA编码基因片段.将目的基因HspA与载体pET32a(+)分别经kpnⅠ和BamH I 双酶切后, 进行连接、测序.同时将重组载体pET32a(+)/HspA和pET32a(+)/Omp18, 分别经Hind III和BamH I 双酶切, 通过凝胶电泳回收pET32a(+)/HspA和Mr 18 000 OMP DNA片段, 经T4连接酶将HspA和Mr 18 000 OMP编码基因通过酶切粘端进行连接, 而后转化并筛选含有两种目的基因的重组载体, 并在大肠杆菌BL21(DE30)中表达.表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后, 以Western blot分析其抗原性.结果:经酶切、测序表明, 插入的基因片段为Hp HspA和Mr为18 000 OMP编码基因, 由891个碱基组成, 与GenBank中登录的序列相比较, 有1.15%的碱基发生变异, 1.26%的氨基酸残基改变.经SDS-PAGE分析发现, 融合基因表达的蛋白Mr为51×103 , 其中pET32a(+)表达的蛋白Mr约为20×103, 可溶性表达产物占菌体总蛋白的18.96%.重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后, 其纯度达95%以上.用Western blot分析显示, 该重组蛋白可被Hp阳性患者的血清及抗Mr为18 000 OMP单克隆抗体所识别, 具有良好的抗原性.结论:成功地克隆并融合表达了Hp HspA和Mr为18 000 OMP, 为Hp疫苗和快速诊断试剂盒的研制奠定了基础.

关键词：幽门螺杆菌、热休克蛋白A、外膜蛋白、原核表达载体

所属期刊栏目：20

分类号：R37;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30371318

在线出版日期：2004-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：62-66