GFP基因转染对骨髓基质细胞体内向软骨细胞分化的示踪作用

摘要：

目的:实现绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)报告基因在骨髓基质细胞(BMSC)中的高效、稳定、持久表达, 直接示踪BMSC在关节软骨缺损内的分布及分化.方法:构建重组逆转录病毒表达载体RV-GFP, 通过PT67包装细胞克隆、G418筛选及扩增, 获得大量含GFP基因的假病毒液, 并直接转染BMSC.将含有GFP基因转染标记的BMSC与生物可降解材料复合后, 植入猪自体关节软骨缺损处, 7个月后共聚焦显微镜检测修复组织中GFP标记的BMSC的分布及分化. 结果:经双酶切鉴定证实重组逆转录病毒表达载体RV-GFP构建成功, 转染PT67细胞后可在荧光激发波长下, 发出明亮的绿色荧光, 转染率达20%～50%, 经G418筛选后可达100%.筛选、扩增后, PT67细胞的上清培养液可成功地转染BMSC, 筛选后能稳定、持久、高效表达GFP.将标记的BMSC植入关节软骨缺损7个月后, 修复组织仍能高效表达GFP, 激光共聚焦显微镜下显示, 多数新生软骨陷窝内有GFP标记的细胞. 结论:构建的重组逆转录病毒GFP载体, 能持久标记骨髓基质细胞, 用于细胞动态变化的研究及细胞转归的示踪, 该方法简便、灵敏、可靠、直观.标记的BMSC可在关节软骨缺损内分化为成熟的软骨细胞, 并在软骨缺损的修复中发挥重要作用.

关键词：重组逆转录病毒载体、绿色荧光蛋白、骨髓基质细胞、软骨形成

所属期刊栏目：20

分类号：Q753(分子遗传学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA205021;国家重点基础研究发展计划973计划G19990543

在线出版日期：2004-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：27-30