人CD81分子的肝组织特异性稳定表达

摘要：

目的: 用肝组织特异性启动子, 实现人CD81分子在小鼠肝癌细胞Hepa 1- 6中的稳定表达. 方法: 从能感染丙型肝炎病毒(HCV)的人肝癌细胞系HepG2中提取RNA, 用随机引物合成cDNA的第1条链, 然后用人CD81基因的特异性引物进行PCR扩增, 克隆PCR扩增片段.将经测序证明为人CD81基因的正确序列, 连接到肝特异性启动子的下游, 使CD81基因的3′端与SV40 polyA加尾序列融合, 得到肝组织特异性表达的人CD81融合基因片段.将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3中, 转染小鼠肝癌细胞系Hepa 1- 6.经G418加压筛选后, 分别用RT-PCR检测人CD81 mRNA的转录, 用FACS检测人CD81蛋白的表达. 结果: 克隆序列的测序结果与GenBank中登录的序列进行对比表明, 得到了人CD81 cDNA的正确序列.构建的人CD81肝特异性融合基因片段可稳定转染Hepa 1- 6细胞, 并可检测到人CD81在mRNA水平上的转录和在蛋白质水平上的稳定表达.结论: 由于CD81是HCV的感染受体, 稳定表达HCV感染受体-人CD81分子的小鼠肝癌细胞克隆的获得, 为今后研究HCV包膜蛋白与CD81的相互作用、筛选感染阻断药物, 以及发展HCV感染的小鼠动物模型奠定了基础.

关键词：丙型肝炎病毒、受体、CD81、小鼠

所属期刊栏目：19

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：601-603