人骨肉瘤9901细胞cDNA表达文库的构建和鉴定

摘要：

目的: 构建骨肉瘤9901细胞cDNA表达文库, 为筛选骨肉瘤特异性抗原创造条件. 方法: 从9901细胞中提取总RNA, 分离mRNA, 反转录合成双链cDNA, 末端削平, 和EcoRⅠ适配子连接.磷酸化EcoRⅠ适配子5′端, 过Sephacryl-S400柱除去小于400 bp的cDNA片段, 与噬菌体λgt11(载体)连接, 用包装蛋白体外包装后形成初级cDNA文库.取适量包装体系倍比稀释后感染E.coli Y1090, 测定文库克隆数、重组率, 用PCR法测定cDNA插入片段的大小.最后扩增cDNA文库. 结果: 建成含1.5×106个重组子的骨肉瘤9901细胞cDNA表达文库, 重组率为94.3%.重组子中插入的外源片段不小于0.5 kb, 平均长约1.4 kb. 结论: 达到良好文库的质量标准, 适合进一步筛选目的cDNA克隆.

关键词：骨肉瘤、反转录、cDNA文库

所属期刊栏目：19

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：598-600