CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

摘要：

目的: 获得原核表达的新的肿瘤抗原CML66蛋白, 并制备兔多克隆抗体.方法: 采用RT-PCR技术从睾丸中获得CML66的cDNA, 亚克隆至pGEMT载体中, 经测序确证后, 将该基因插入原核表达载体pET32b(+)中, 通过电穿孔技术转化E.coli表达菌BL21(DE3), 以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达, 并经Ni2+亲和柱层析纯化.通过SDS-PAGE、Western blot鉴定后, 应用纯化蛋白免疫家兔, 制备多克隆抗体.结果: 获得的CML cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列一致.用纯化的目的蛋白免疫家兔后, 获得高滴度的特异性兔抗血清.结论: 成功地克隆CML66基因, 建立了原核表达、纯化体系.制备纯化的CML66蛋白和高滴度、特异的兔抗血清.

关键词：CML66、原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：19

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39970824

在线出版日期：2004-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：582-584