用于构建抗人TNF嵌合抗体的鼠单克隆抗体中和活性的鉴定

摘要：

目的: 筛选构建抗人TNF嵌合抗体所需高质量的鼠源性mAb. 方法: 从一组分泌抗人TNF mAb杂交瘤细胞中, 挑取3株D2、E6和F6, 按常规方法制备腹水.用饱和硫酸铵盐析后, 分别用蛋白A亲和层析和QFF阴离子交换层析法, 纯化D2株分泌的mAb(IgG2b)和E6和F6株分泌的mAb(均为IgG1).纯化前后, 3株mAb的效价, 采用间接ELISA法测定.纯化的3株mAb的中和活性, 通过它们对TNF诱导的L929细胞死亡和上调ECV304细胞上ICAM-1表达的抑制作用来进行鉴定.结果: 间接ELISA检测表明, 3株mAb D2、E6和F6纯化前的效价分别为1×10-6、1×10-7和1×10-7, 纯化后效价分别为0.01、0.002和0.002 mg/L.mAb中和活性的检测表明, 浓度为0.16、0.40和0.50 mg/L的D2、E6和F6, 可保护2×104 U/L TNF诱导的L929细胞半数不发生死亡.1.0 mg/L的mAb D2、E6和F6, 对2×105 U/L TNF使ECV304细胞上ICAM-1表达上调的抑制率, 分别为70.1%、60.1%和60.1%; 3株mAb的浓度降到0.1 mg/L时, 抑制率仍可达到60.1%、53.7%和59.0%.结论: 所选3株mAb的效价及中和活性均较高, 可作为抗人TNF嵌合抗体的候选mAb.

关键词：TNF、mAb、中和活性、嵌合抗体

所属期刊栏目：19

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金39870672;军队科研项目01Z080

在线出版日期：2004-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：576-579