凋亡相关蛋白(eIF-5A)-双向电泳分离、编码基因克隆和表达、多抗制备

摘要：

@@ 蛋白质组是指特定细胞、组织或生物体在特定时间所表达的全部蛋白, 对其进行分析的学科被称为蛋白质组学[1].在蛋白质组学的诸多研究方法中, 出现最早且目前仍能提供蛋白质组分析所要求的高分辨率的唯一技术, 是双向电泳(2-D PAGE), 由于其可提高分辨率、重复性和简易性良好, 已成为蛋白质组研究的核心技术[2].2-D PAGE用于蛋白质组蛋白表达的全面分析时, 能够分离特定细胞和组织中成百上千的蛋白形式(包括翻译后的变异体).本研究中, 我们以白血病细胞系(Mo-7e细胞)为例, 采用2-D PAGE技术分离凋亡相关蛋白, 用两种常用的质谱方法MALDI-TOF/MS和ESI/MS/MS, 对其中的T点进行了鉴定.以设计的引物, 采用RT-PCR从基因组中钓取了该基因(eIF-5A), 并在E.coli中获得表达.纯化的重组蛋白免疫家兔获得了抗eIF-5A的多抗, 为后续的eIF-5A功能研究提供了检测工具.在应用宽pH范围胶条(pH 3～10)分离白血病细胞凋亡相关蛋白的基础上, 进一步采用窄pH范围胶条(pH 4～7)分离凋亡相关蛋白, 使分离和识别差异蛋白的效果明显得到改善, 且能够识别相同区域中更多的差异蛋白.

关键词：双向电泳、凋亡相关蛋白、eIF-5A、基因克隆

所属期刊栏目：19

分类号：R392.11

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA233041

在线出版日期：2004-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：573-575