GAP-43原核表达载体的构建、表达及抗GAP-43单克隆抗体的制备

摘要：

目的:原核表达神经生长相关蛋白-43(GAP-43),并制备抗GAP-43的单克隆抗体(mAb).方法:从含有GAP-43 cDNA的质粒中,用PCR扩增GAP-43 cDNA的全长编码序列,克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建GAP-43的高表达工程菌,并以IPTG诱导表达目的蛋白.通过亲和层析法纯化表达的GST-GAP-43融合蛋白,并以此为抗原制备mAb.结果:酶切鉴定证明,获得含有目的基因片段的重组质粒.表达的GST-GAP-43融合蛋白以可溶性的形式存在.ELISA检测表明,获得的抗GAP-43 mAb效价为1∶108,其IgG的亚类为IgG2a,亚型问型. 用Western blot 检测大鼠脑匀浆蛋白,在相对分子质量(Mr)为50 000处有一条特异性带.用此mAb进行荧光免疫法检测表明,在致敏豚鼠的肺切片中,有GAP-43阳性的神经纤维.结论:所获抗GAP-43 mAb的特异性强、效价高,对进一步研究GAP-43在神经系统中的作用提供了有用的试剂.

关键词：GAP-43、原核表达、单克隆抗体

所属期刊栏目：19

分类号：R392.1

资助基金：国家自然科学基金39860130

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：480-482