小鼠FasL基因的克隆和在软骨细胞中表达

摘要：

目的: 获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆, 通过逆转录病毒表达系统pLNCX2在软骨细胞中进行表达, 并分析其功能.方法: 应用RT-PCR和T-A克隆技术, 从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中, 扩增mFasL cDNA并克隆到T载体中, 再亚克隆到pLNCX2 中.转染软骨细胞后, 以流式细胞仪检测mFasL蛋白的表达, 以单向混合淋巴细胞反应鉴定其活性.结果: 成功地克隆了0.855 kb的mFasL cDNA, 并经测序确证.通过pLNCX2转染软骨细胞, 转染率为60.64%.流式细胞仪检测到FasL蛋白的表达, 并能显著抑制同种异体的单向混合淋巴细胞反应, 刺激指数下调到未转染软骨细胞的11.71%.结论: 克隆到的mFasL基因, 并能通过pLNCX2有效表达.表达产物具有显著抑制同种异体单向混合淋巴细胞反应的活性.

关键词：逆转录病毒、FasL、RT-PCR、软骨细胞、T-A克隆

所属期刊栏目：19

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G1999054304

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：326-328,337