人KIR2DL1-Ig融合蛋白在COS-7细胞的表达

摘要：

目的: 获得人KIR2DL1分子(killer Ig-like receptor 2DL1)胞外区与人IgG Fc段的融合蛋白.方法: 从人外周血单个核细胞中提取总RNA, 通过RT-PCR扩增编码KIR2DL1胞外段cDNA, 经Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后, 定向插入真核细胞表达载体CD5lnegl中.构建的重组真核表达载体CD5lnegl-KIR2DL1.经酶切分析和测序鉴定后, 通过DEAE-dextran/chloroquine法转染COS-7细胞.瞬时表达后, 取培养上清液经亲和层析、ELISA、SDS-PAGE及Western印迹,鉴定融合蛋白的表达及其免疫学活性.结果: 序列测定证实, 该重组表达载体含有正确的KIR2DL1胞外区基因序列.重组真核表达载体CD5lnegl-KIR2DL1转染COS-7细胞后, ELISA法检测细胞培养上清中有融合蛋白的表达.SDS-PAGE结果显示, 该融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为73 000.Western印迹结果证实, 该蛋白能被特异性单克隆抗体(mAb)EB6所识别.结论: KIR2DL1-Ig融合蛋白表达载体成功构建并在COS-7细胞中获得功能性表达, 为KIR2DL1的功能及其配体MHC的研究奠定了基础.

关键词：KIR2DL1、融合蛋白、基因表达

所属期刊栏目：19

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30070784

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：245-247