抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达

摘要：

目的:构建抗人HBsAg单链抗体基因,并分析其在COS-7细胞中的表达.方法:以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板,分别扩增其轻、重链可变区(VL、VH)基因,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly 4Ser)3的编码序列连接,并引入前导肽编码序列,构建具有L-VH-Linker-VL结构的单链抗体基因.将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体pEGFP-N3,并转染COS-7细胞进行表达.结果:经测序表明,前导肽、连接肽、VL 及VH的序列正确.酶切鉴定证实,成功地构建了GFP基因融合表达载体.瞬时转染COS-7细胞后,通过荧光显微镜观察证实有ScFv融合蛋白的表达.转染细胞的培养上清浓缩后,进行 SDS-PAGE及Western blot 分析,可检出ScFv融合蛋白的分泌性表达.培养上清的间接ELISA 检测证实,所表达的单链抗体具有与HBsAg结合的特异性.结论:成功地构建了抗人HBsAg 单链抗体基因,并可在COS-7细胞中分泌性表达.

关键词：单链抗体、表达、乙型肝炎、HBsAg

所属期刊栏目：19

分类号：Q255(细胞生理学)

资助基金：国家自然科学基金39925036;军队科研项目98J009;国家高技术研究发展计划863计划2001AA217101

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：163-167