小鼠NGF基因真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

摘要：

目的:构建小鼠β-NGF基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH 3T3 细胞系中NGF的表达情况. 方法:用基因重组技术,将小鼠β-NGF的成熟cDNA序列及其前导序列,克隆到真核表达载体pcDNA3.1+中,用限制性内切酶酶切鉴定重组体.利用脂质体FuGENETM6方法,转染NIH 3T3细胞.转染后72 h,用G418筛选阳性克隆并培养至20 d.对阳性克隆培养上清中NGF的表达用Western blot分析并观察该上清中NGF对PC12细胞突起生长的作用.结果:β-NGF基因在NIH 3T3细胞中获得表达.阳性克隆培养上清能促进PC12细胞突起生长. 结论:重组真核表达载体pcDNA3.1+/NGF构建成功,NGF蛋白在NIH 3T3细胞中表达,并具有良好的生物学活性,为进一步开展NGF基因治疗神经系统疾病奠定了基础.

关键词：β-神经生长因子、重组表达载体、NIH 3T3细胞系、基 因转染、脂质体FuGENETM6

所属期刊栏目：19

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：124-126,129