抗人大肠癌单链抗体的构建、表达及其体内外生物学活性的检测

摘要：

目的将抗人大肠癌单克隆抗体ND-1(mAb)的VH和VL基因进行重组, 构建和表达ND-1scFv, 并对其在体内外的生物学活性进行检测.方法采用RT-PCR技术, 从能够分泌mAb ND-1的鼠杂交瘤细胞中扩增VH和VL基因, 通过重叠延伸拼接PCR在VH和VL基因间引入连接短肽, 体外构建ND-1scFv基因, 并在大肠杆菌中表达.采用间接免疫荧光(IFA)及ELISA法测定ND-1scFv的免疫学活性.用99Tcm标记ND-1scFv后, 将偶联物给予荷瘤裸鼠, 观察其在动物体内的显像及生物学分布.结果 SDS-PAGE显示, 重组蛋白Mr为30 000, 同预期结果一致.IFA及ELISA检测表明, ND-1scFv保留了与亲本抗体相近的免疫学活性, 对表达相应抗原的靶细胞具有特异结合活性.体内放射免疫实验显示, 99Tcm- ND-1scFv在荷瘤小鼠体内的生物学分布, 呈明显的肿瘤积聚趋向, 注入体内1 h血中T/NT即达2.61.结论获得免疫学活性良好的ND-1scFv, 对荷瘤动物体内肿瘤的定位快速、准确, 可望成为有效的肿瘤诊断和治疗的导向载体.

关键词：单链抗体、大肠癌、表达、99Tcm

所属期刊栏目：18

分类号：R735.3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金85-722-18-02

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：611-613