人乳头瘤病毒18型L1-E6、L1-E7嵌合基因表达载体的构建及表达

摘要：

目的构建HPV 18 L1-E6、L1-E7嵌合基因的表达载体, 并在CHO细胞中表达.方法克隆HPV 18 L1-E6和L1-E7基因, 插入中介载体pGEMT-Easy中并测序鉴定.采用PCR定点突变法, 突变L1-E6、L1-E7基因序列中与转化作用相关的位点, 分别与L1基因连接后插入真核表达载体pVAX1, 构建真核表达质粒pVAX1-L1E6Mxx、 -L1E7Mxx.用磷酸钙沉淀法, 转染CHO细胞, 以抗HPV-18L1、抗E6和抗E7特异性单克隆抗体(mAb)做ELISA和免疫细胞化学法检测.结果 ELISA检测显示, 转染各种pVAX1-L1E6Mxx、 -L1E7Mxx融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P-N值均>2.1; 免疫细胞化学检测, 在胞浆、 胞核可见棕黄色颗粒.结论所构建的pVAX1-L1E6Mxx-E7Mxx融合蛋白表达质粒, 可在转染细胞内表达相应的L1-E6Mxx和L1-E7Mxx蛋白, 为今后进行DNA疫苗的研究奠定了基础.

关键词：人乳头瘤病毒18型、表达载体、定点突变

所属期刊栏目：18

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30070848;国家高技术研究发展计划863计划2001AA215221

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：558-561