以反向 PCR 扩增抗人宫颈癌单克隆抗体重链可变区基因

摘要：

@@ 单克隆抗体(mAb)V区cDNA序列的克隆是构建单链抗体(ScFv) 的关键一步[1].通常是在抗体V区序列两头-5′和3′端设计带简并碱基的引物, 用普通PCR法进行扩增[2].该法虽看似简单, 但局限性很大, 若遇到同源性差且复杂的序列, 则难以获得.同时, 因带有简并碱基, 可使PCR产物不纯, 而影响蛋白的表达及其功能.我们在构建抗人宫颈癌ScFv过程中, 用常规PCR法扩增出VL cDNA序列, 经多种方法尝试, 均未获得VH cDNA序列.随后, 采用反向PCR技术扩增并经测序证明, 确为VH cDNA序列, 为重组制备ScFv奠定了基础.

关键词：单链抗体、重链、可变区、反向 PCR、宫颈癌

所属期刊栏目：18

分类号：R737.33(肿瘤学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：489-490