幽门螺杆菌Mr 26 000外膜蛋白编码基因的克隆及表达

摘要：

目的构建含幽门螺杆菌(Hp)Mr 26 000外膜蛋白编码基因的重组载体,并在E. coli BL21中表达.方法用PCR从Hp染色体中,扩增Mr 26 000外膜蛋白编码基因片段.将目的基因与pET32a(+)同时经BamH I、Hind Ⅲ双酶切、纯化、连接后,构建含有目的基因的重组载体.以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21(DE30)并表达.表达产物经纯化后,用ELISA法检测其抗原性.结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp Mr 26 000的外膜蛋白编码基因,与Tomb等的报道相比较,有1.1%的bp发生变异,1.51%的氨基酸残基改变.经SDS-PAGE分析发现,融合基因表达的蛋白Mr为46×103,可溶性表达产物占细菌总蛋白的38.96%.重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上.ELISA法检测显示,该重组蛋白可被Hp阳性患者的血清所识别,具有良好的抗原性.结论成功地克隆并表达Mr为26 000的Hp外膜蛋白编码基因,为Hp蛋白疫苗的研制和快速诊断试剂盒的研究打下了基础.

关键词：幽门螺杆菌、外膜蛋白基因、原核表达

所属期刊栏目：18

分类号：Q78;R37(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：376-379