抗胶质瘤重组免疫毒素SZ39-PE40的原核表达、纯化及复性研究

摘要：

目的构建抗胶质瘤重组免疫毒素SZ39-PE40基因并在大肠杆菌中表达.对主要以包涵体形式表达的产物进行变性和复性研究. 方法从质粒pVC85中克隆PE40基因,与抗胶质瘤的单链抗体(ScFv)-SZ39基因进行拼接,构建重组免疫毒素SZ39-PE40基因,并在大肠杆菌中表达.对表达产物(包涵体)进行分离、纯化、变性及复性处理后,以ELISA及免疫荧光技术,检查其对胶质瘤细胞的结合活性.结果 SDS-PAGE及Western blot分析显示,表达产物的相对分子质量(Mr)为68 000左右,与SZ39-PE40融合蛋白的理论推算值相符.凝胶灰度扫描显示,其表达量占菌体总蛋白的20%.ELISA及免疫荧光技术均证实,经复性的SZ39-PE40融合蛋白具有结合胶质瘤细胞SHG- 4的活性.结论成功地构建并在原核细胞中表达SZ39-PE40融合蛋白基因,复性的表达产物具有特异性识别胶质瘤细胞的活性,为进一步应用于胶质瘤的导向治疗奠定了基础.

关键词：胶质瘤、重组免疫毒素、变性、复性

所属期刊栏目：18

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39670735

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：355-358