10.3321/j.issn:1007-8738.2002.04.009
人PDGF-A基因的克隆、表达及表达产物的纯化
目的克隆血小板衍生的生长因子A链(PDGF-A)的基因,并在大肠杆菌中表达.方法利用RT-PCR法,从人肝癌细胞系(HHCC)的总RNA中,扩增PDGF-A的全长cDNA,再用PCR法扩增PDGF-A成熟蛋白的全长编码序列.编码序列经测序验证后,克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建PDGF-A的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白,并进行谷胱甘肽(GST)亲和层析纯化.结果以RT-PCR扩增的PDGF-A基因的全长为1 255 bp,以PCR扩增得到其成熟蛋白的编码序列为531 bp.构建了PDGF-A基因的原核高效表达载体pGEX-PDGF-A,表达产物主要位于包涵体内.对包涵体蛋白进行变性和复性处理后,利用亲和层析法获得纯化的目的蛋白.结论成功地扩增到PDGF-A成熟蛋白的编码序列,并在大肠杆菌高效表达,为进一步对PDGF-A功能的研究提供了有利的工具.
PDGF-A、克隆、表达、纯化
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R392.12
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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