人热休克蛋白70基因的原核表达

摘要：

目的表达人热休克蛋白70(HSP70)并进行鉴定.方法用PCR方法扩增人HSP70基因片段,经T-A克隆法克隆到载体pUCm-T中,并进行DNA测序.将人HSP70基因片段从载体pUCm-T中酶切后,构建重组表达载体pGEX- 4T-1-HSP70,并转化大肠杆菌JM109,用IPTG诱导.收集细菌,菌体裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测.结果人HSP70基因的PCR产物约为1.9 kb.序列测定结果证实,所获目的序列与文献[3]报道的相一致.经EcoR I和Xho I酶切鉴定证实,人HSP70基因已成功地克隆到表达载体pGEX- 4T-1中.构建的表达载体pGEX- 4T-1-HSP70,能很好地在大肠杆菌中表达相对分子质量(Mr)为96 000并具有抗原特性的融合蛋白.结论成功地克隆并表达人HSP70基因,为研究HSP70的结构、功能与临床应用提供了必要条件.

关键词：热休克蛋白70、基因重组、表达

所属期刊栏目：18

分类号：R349.83(人体生物化学、分子生物学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：335-338