二硫键稳定的抗肝癌人源化scFv-hTNFα突变体融合基因在大肠杆菌中表达

摘要：

目的提高抗肝癌抗体靶向人肿瘤坏死因子(hscFv25-hTNFα)的稳定性和杀伤活性,并探讨该新型靶向细胞因子在大肠杆菌中的可溶性表达.方法以引物PCR法和重叠延伸PCR法,对人源化抗肝癌hscFv25及hTNFα基因进行定点突变,构建重组表达载体pGEX-hFvT,并以IPTG在大肠杆菌中诱导表达.用免疫组化染色和MTT比色法, 分别检测重组蛋白的抗体和hTNFα突变体的双重活性.结果重组基因在大肠杆菌中获得高效可溶性表达.表达产物具有抗体和hTNFα突变体的双重活性,重组蛋白的稳定性得到大幅度提高,抗体活性于4℃放置3个月活性无明显下降,抗肿瘤活性较天然hTNFα高4倍.结论重组基因在大肠杆菌中获得了高效功能性表达;重组蛋白稳定性及抗肿瘤活性得到大幅度提高,为进一步的临床应用研究奠定了基础.

关键词：肝细胞肝癌、单链抗体、TNFα、突变体、靶向细胞因子、可溶性表达

所属期刊栏目：18

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：221-224