人LIGHT基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建

摘要：

目的克隆人LIGHT基因,构建其重组腺病毒载体,以研究LIGHT过表达与腺病毒感染对细胞生长的影响.方法用RT-PCR法从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人的LIGHT全长基因.将LIGHTcDNA克隆到穿棱载体pAdTrack-CMV-LIGHT重组质粒中,经酶切线性化后,将重组质粒pAdTrack-CMV-LIGHT和骨架质粒pAdEasy-1,以电穿孔法共转染大肠杆菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒.最后,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒,用荧光显微镜、PCR及Western blot分析LIGHT基因的表达. 结果用RT-PCR法从人的PBMC中,扩增出723bp的cDNA,测序证实为人LIGHT基因.荧光显微镜、PCR及Westernblot证实,LIGHT重组腺病毒可感染293细胞,并在293细胞内进行有效的复制.结论成功地克隆了人LIGHT基因,并构建了其重组腺病毒载体,为进一步研究LIGHT基因的功能提供了条件.

关键词：腺病毒、表达载体、人LIGHT基因、基因克隆

所属期刊栏目：18

分类号：R735.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30171051

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：121-124