人颗粒酶B融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用

摘要：

目的观察颗粒酶B(granzyme B)融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用. 方法用RT-PCR法获取人granzymeB全长cDNA,经重组PCR将活性型序列的5′端与一段PE转膜肽序列融合.将所获重组基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)共表达载体pIRES2-EGFP,转染HeLa细胞.用免疫组化染色法检测目的蛋白的表达,荧光显微镜和电镜观察转染细胞的形态和结构.结果成功地获得了野生型granzyme BcDNA及其融合蛋白基因,并构建了融合蛋白基因与GFP基因共表达的真核载体.转染HeLa细胞后,检测到目的蛋白的表达.荧光显微镜观察转染细胞有两种变化:一种表现为体积增大并常伴随多核现象;另一种出现细胞质和细胞核的固缩.电镜观察显示,多核巨细胞生长状态良好,固缩的小细胞则呈现凋亡的典型特征.结论 granzymeB融合蛋白在HeLa细胞中异位表达,可使转染细胞的形态发生变化,出现多核的大细胞和核固缩的小细胞.

关键词：granzyme B、融合蛋白、HeLa细胞、表达

所属期刊栏目：18

分类号：Q255(细胞生理学)

资助基金：国家杰出青年科学基金39925036;军队科技攻关项目018090

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：113-116