人噬菌体抗体库中异常重组子的分析

摘要：

目的阐明在噬菌体抗体库技术中,选择适当限制性内切酶酶切位点的重要性,并介绍人抗体可变区胚系基因的限制酶谱.方法从正常人外周血提取淋巴细胞总RNA,用RT-PCR 扩增IgM和IgG1的Fd片段及κ链基因,重组到载体p3MH中构建噬菌体抗体库.以限制性内切酶消化及电泳分析所获重组克隆;用PCGENE软件分析人抗体可变区胚系基因的限制性内切酶谱.结果在构建抗体库的过程中,发现高频率的异常重组子克隆.经序列分析证实,在人VH 基因片段中,存在用于克隆轻链的Sac I位点.对人全部功能性可变区胚系基因进行限制性内切酶谱分析,发现人VH 第Ⅳ家族的11个成员均含有Sac I位点,其它限制酶切位点在抗体可变区胚系基因中具有不同的出现率.结论构建抗体库时,用于重组可变区基因的酶切位点,对库的构建具有重要的影响,因此,应对表达载体所用的限制性内切酶进行精心选择.现在比较广泛使用的pCOMB系统载体不利于良好性能抗体库的构建.

关键词：人抗体可变区基因、抗体库、限制性内切酶

所属期刊栏目：18

分类号：R392

资助基金：军队医药卫生科研项目01Z015

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：63-66