抗人红细胞血型A抗原单链抗体原核表达及活性测定

摘要：

目的构建并表达抗人红细胞血型A抗原单链小分子抗体(single-chain Fv)蛋白.方法设计合成抗重、轻链可变区引物,通过重叠延伸拼接PCR技术,在50A mAb VH和VL基因间引入连结短肽,体外构建50A ScFv基因并进行序列分析;将其克隆入表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中诱导表达;并以免疫印迹测定重组蛋白的生物学活性.结果序列分析表明,50A ScFv基因全长747 bp,编码249个氨基酸;重组体表达产物聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为29 000左右,与预期的结果一致,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在;光密度扫描结果表明,重组蛋白占菌体总蛋白的16.2%,免疫印迹试验显示,重组小分子抗体保留了亲本mAb的特异性亲和力.结论成功地构建50A ScFv基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研制基因工程血型检定抗体奠定了基础.

关键词：ABO血型抗原、基因工程抗体、单链抗体、表达

所属期刊栏目：17

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39670645;军队医药卫生科研项目96M025

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：271-273