可溶性CD14突变体的构建与表达研究

摘要：

目的将人CD14信号转导启动区97～101氨基酸进行丙氨酸置换突变,构建真核表达质粒,并在COS-7细胞中进行表达.方法采用两轮聚合酶链反应定点突变方法,对人可溶性CD14推测中的LPS信号转导启动区之一,N端97～101氨基酸用丙氨酸进行置换突变.将突变PCR片段克隆至载体pGEM-T,进行酶切鉴定及序列分析.将突变基因亚克隆至真核表达质粒pCIneo中,转染C0S-7细胞进行瞬时表达,并用SDS-PAGE和Western blot检测表达蛋白.结果测序结果证实,CD14的N端97～101氨基酸发生了连续丙氨酸置换突变.SDS-PAGE表明,突变体基因在COS-7细胞中得到瞬时表达.Western blot显示,抗CD14多克隆抗体可与重组表达的突变体蛋白特异性结合.结论成功地构建并表达CD14 97～101氨基酸丙氨酸置换突变体,为研究CD14信号转导缺失突变体的生物学活性与功能打下了基础.

关键词：CD14、基因突变、聚合酶链反应、基因表达

所属期刊栏目：17

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39870316

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：241-244