人源性羧肽酶 A突变体基因的构建及表达

摘要：

目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变。方法从人正常肺组织中提取RNA，并进行逆转录得到人羧肽酶A(hCPA)。以计算机模拟hCPA的结构，寻找合适的突变位点。用PCR重叠延伸法，对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达。结果序列分析表明，所获hCPA的核苷酸序列为1251bp，编码417个氨基酸。hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A，其余核苷酸序列均未发生变化，相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸。将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3h后,表达量高达30％左右。结论成功地构建并表达了mhCPA基因，为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶前药疗法”(ADEPT)中的应用奠定了基础

关键词：羧肽酶A、基因克隆、基因突变、测序

所属期刊栏目：17

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：高等院校骨干教师基金2000-65-66;第四军医大学校科研和教改项目CX99A014

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：106-108,122