全长人穿孔素cDNA的克隆与3'端部分表达

摘要：

目的克隆人穿孔素(perforin, PFP)基因并选择性地体外表达抗原特异性C端肽段。方法利用RT-PCR技术，从人肝总RNA中克隆全长PFP cDNA并进行序列测定分析。将编码PFP C端(hPFP-C)125个氨基酸的cDNA片段亚克隆，并插入载体pGEX-2T中用IPTG诱导融合蛋白表达。目的肽段采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析和凝血酶酶切纯化，并用溶血法测定其生物学活性。结果克隆的全长人PFP cDNA与已发表的PFP基因序列相比较，有4个碱基不同，导致3个氨基酸残基改变。重组基因在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达的融合蛋白的相对分子质量(Mr)为40 000，纯化后的hPFP-C肽段Mr为14 000。重组hPFP-C肽段与兔红细胞共育，呈现钙依赖的溶血活性。结论人PFP基因可能存在多态性，其C端肽段亦有溶解兔红细胞的活性。

关键词：穿孔素、基因克隆、基因表达、溶血活性

所属期刊栏目：16

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏省自然科学基金BK99157

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：472-474,477