人肿瘤坏死因子α单链抗体的原核表达和活性分析

摘要：

目的在大肠杆菌中表达抗人TNF-α单链抗体(ScFv),并分析它的结合活性和中和活性.方法在获得抗人TNF-α E6ScFv基因的基础上,用热诱导载体pBV220在大肠杆菌中表达E6ScFv蛋白.ELISA测定抗体的结合活性,实时BIA技术确定亲和常数,L929细胞毒试验分析其中和活性.结果克隆了抗人TNF-α E6SeFv基因的热诱导载体pBV220在大肠杆菌中,经42℃热诱导,得到了相对分子质量(Mr)约为27 000的重组蛋白质,表达量占菌体总蛋白的18%.对在大肠杆菌中表达的E6ScFv进行了复性和亲和层析纯化,并进一步证实:①E6ScFv具有与hT-NF-α结合的活性,其结合表位与亲本抗E6单克隆抗体(mAb)相同;②E6ScFv与hTNF-α的亲和常数为3.71×104M-1;③E6ScFv具有中和hTNF-α细胞毒作用的活性.结论以上结果有助于ScFv拮抗TNF-α的治疗.

关键词：肿瘤坏死因子α、单链抗体、大肠杆菌、表达

所属期刊栏目：16

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39670695

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：427-430