抗人红细胞血型A抗原双价小分子抗体基因的构建和表达

摘要：

目的分离抗人红细胞血型A抗原单抗50A可变区基因,构建并表达其双价小分子抗体(diabody)融合蛋白.方法设计合成抗体重轻链可变区引物,通过加端PCR技术,在50A Va和VL基因两端引入连结短肽和适当的限制性酶切位点,体外构建50A diabody基因并将其克隆入pGEX-4T-2表达载体中,在大肠杆菌中诱导高效表达.用双脱氧核苷酸链末端终止法分析其核苷酸序列.结果序列分析表明,50A diabody基因全长为717bp;其中VH长366bp,编码122个氨基酸;VL长336bp,编码112个氨基酸,两者以五肽连接头相连.重组体表达产物SDS-PAGE电泳显示,其相对分子质量(Mr)为51 000左右,与预期的结果相符;光吸收(A)扫描结果表明,GST-50A diabody融合蛋白占菌体总蛋白的22.5%,产物主要以不溶性的包涵体形式存在.结论成功构建表达了50A双价小分子抗体基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为研制基因工程血型检定抗体奠定了基础.

关键词：ABO血型抗原、工程抗体、大肠杆菌、表达

所属期刊栏目：16

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39670645;军队医药卫生科研项目96M025

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：409-411