一种可分泌多种活化型因子的工程细胞的建立

摘要：

该研究目的是构建可分泌多种活化型因子的工程细胞,用于诱导干细胞分化为耳蜗神经元样细胞的共培养.首先将大鼠脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经营养因子3(neurotrophin 3,NT3)的成熟肽编码序列用内部核糖体进入位点序列(internal ribo-some entry site,IRES)连接起来,再插入慢病毒表达载体pLVX-IRES-tdTomato,并包装成慢病毒,再将慢病毒分别感染HEK293T细胞和已有的表达活化型表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF1)和成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)的HEK293T/3GF细胞,采用有限稀释法获得稳定转染的细胞克隆,利用West-ern blot检测细胞培养液上清中的BDNF和NT3的表达情况,并通过检测人肺癌A549细胞和大鼠嗜铬细胞瘤PC-12细胞的增殖以及PC-12细胞的分化情况对细胞表达的因子活性进行鉴定.结果 表明,可同时表达分泌活化型EGF、IGF1、FGF2、BDNF和NT3的工程细胞构建成功,为后续干细胞共培养和诱导分化研究提供了有力工具.

关键词：生长因子、神经营养因子、分泌、干细胞、工程细胞

所属期刊栏目：44

分类号：R741;R329.2;R6

资助基金：浙江省重大科技专项重大社会发展项目;资助的课题

在线出版日期：2022-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1925-1934