冻存后脐血NK细胞的培养及CAR-NK的功能初探

摘要：

该研究优化冻存后脐血NK细胞的培养条件,构建了靶向CD19的CAR-NK细胞,并探究了CD19-CAR-NK对CD19+B细胞淋巴瘤的杀伤作用.首先将冻存的脐血单个核细胞复苏并静置18 h,通过CD56磁珠纯化NK细胞,使其在CBMC中的比例从13.8％提高至96.6％.然后比较使用不同细胞因子及其组合对NK细胞增殖、分化、凋亡及功能的影响,发现IL-2和IL-15均能活化NK细胞,但IL-2培养时NK细胞增殖优于IL-15(P＜0.05),IL-2+15下CD56dim NK亚群占比[(74.33±5.03)％]最多,凋亡[(4.6±0.14)％]最少,累计增殖(62.67±3.21)倍,显著优于其他细胞因子组合(P＜0.05).该研究使用PDK1抑制剂BX795提高CAR-19慢病毒载体对NK细胞的转导效率,发现6 μmol/L BX795可将病毒转导效率提高3.6倍,且在此浓度下病毒转导效率[(36.4±1.91)％]最大.最后在体外验证CD19-CAR-NK对CD19+肿瘤细胞的杀伤能力,发现CD19-CAR-NK可增强NK细胞对Nalm6的杀伤作用,但不影响NK对Nalm6-CD19KO的杀伤.综上所述,该研究得出IL-2+15是冻存后脐血NK细胞的最佳细胞因子组合,被CAR修饰的NK细胞能特异性识别CD19抗原并杀伤CD 19+肿瘤细胞.

关键词：CD19、自然杀伤细胞、脐带血、免疫细胞治疗

所属期刊栏目：44

分类号：R733.7;R3;R811.5

在线出版日期：2022-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1916-1924