牙鲆卵原细胞鉴定、分离及纯化的初步研究

摘要：

为获得高比例和高教量的卵原细胞,采用酶组合消化和Percoll梯度离心法开展了不同月龄牙鲆卵原细胞分离纯化的研究.通过光学观察及Vasa蛋白在生殖细胞的定位对卵原细胞进行了鉴定区分.结果表明,所获卵巢单细胞悬液中,6月龄每毫克卵巢组织获得的卵原细胞量为(9.86±1.02)× 104个,显著高于18月龄和30月龄(P＜0.05).Percoll梯度离心后,卵原细胞主要分布于L-15与20％ Percoll梯度液间、20％～35％ Percoll梯度液间,其占比高达75％以上,显著高于纯化前卵原细胞占比(P＜0.05);且细胞存活率高达84％以上,与纯化前细胞存活率无显著性差异(P＞0.05).除18月龄外,6月龄和30月龄每毫克卵巢组织获得的卵原细胞量纯化前后均无显著性差异(P＞0.05).该文通过酶组合消化和Percoll梯度离心的方法对最适月龄-6月龄牙鲆卵原细胞进行分离纯化,最终可获得高比例、高数量和高活性的卵原细胞,为进一步开展牙鲆生殖细胞移植、基因修饰等研究提供了必备的细胞来源.

关键词：牙鲆、卵原细胞、鉴定、分离、纯化、vasa

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资助基金：中国水产科学研究院基本科研业务费2016PT06;国家水产种质资源共享服务平台运行服务项目2018DKA30470;现代农业产业技术体系专项经费CARS-47资助的课题

在线出版日期：2018-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1510-1517