BCL3基因敲除对线粒体呼吸作用及ATP合成的影响
B淋巴细胞瘤/白血病因子3(B cell CLL/lymphoma 3,BCL3)是一个转录辅调节因子,通过结合转录因子对基因表达起激活或抑制作用,维持细胞存活,但其机制尚不清楚.该研究采用 CRISPR/Cas9技术建立BCL3基因敲除的人宫颈癌HeLa细胞,实时荧光定量PCR和Western blot验证敲除情况.使用特异性荧光探针法、萤火虫荧光素酶法、活细胞能量代谢动态分析法等技术手段检测基因敲除(BCL3-KO)对细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)水平、线粒体膜电位、线粒体呼吸作用以及ATP生成的影响.结果发现,BCL3-KO细胞内的相对ROS水平上升约50％,采用转染的方式恢复细胞内表达BCL3基因则可抑制ROS水平的上升;与野生型HeLa细胞相比,BCL3-KO细胞的线粒体膜电位明显降低(P<0.001);BCL3敲除不影响细胞基础有氧呼吸速率,但引起碳酰氰4-(三氟甲氧基)笨腙[carbomyl cyanide 4-(trifluorometyocy)phenylhydrazone,FCCP]诱导的最大(极限)呼吸速率显著上升(P<0.001);相比野生型细胞,BCL3-KO细胞中的ATP的浓度下降40％.该研究揭示了BCL3对线粒体功能的调控作用,可能是其维护癌细胞存活的原因之一.
B淋巴细胞瘤/白血病因子3、基因敲除、CRISPR/Cas9、线粒体、呼吸作用
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R733.1;R285.5;R979.1
2018-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
533-541
