线粒体DNA数目不同的人角质形成细胞模型的建立

摘要：

该研究采用溴化乙锭(ethidium bromide,EtBr)对人永生化角质形成细胞(HaCaT)进行诱导,采用RT-PCR法、MTT法和健那绿染色技术联合鉴定EtBr对HaCaT细胞线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)拷贝数的影响,建立不同mtDNA拷贝数目的HaCaT细胞模型.结果显示,HaCaT细胞经100 ng/mL和50 ng/mL EtBr分别处理10 d后,细胞形态随着处理时间的延长发生改变,由规则铺路石形状逐渐变圆,某些细胞体积变小,成团生长,细胞膜边缘不光滑,且随着mtDNA数目的减少,细胞增殖速率明显下降.RT-PCR分析结果显示,与对照组相比,50 ng/mL和100 ng/mL EtBr处理10 d的HaCaT细胞中,mtDNA的拷贝数分别减少了52.9％和97.6％”以线粒体DNA脱氢酶1(mitochondrial NADH dehydrogenase 1 gene,ND1)与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的比值来表示mtDNA的相对拷贝数变化情况”.健那绿染色显示,对照组HaCaT细胞中可见分散存在的蓝绿色线粒体颗粒,1 00 ng/mL EtBr处理10d后的HaCaT细胞中,显微镜下蓝绿色线粒体颗粒明显减少.综上所述,该研究证明了HaCaT细胞可通过EtBr诱导被成功培养成ρ-细胞,且EtBr浓度与HaCaT细胞mtDNA拷贝数的变化在一定的范围内存在着剂量-效应关系.

关键词：线粒体DNA、线粒体DNA缺失HaCaT细胞系、溴化乙锭

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分类号：R73;R97

资助基金：国家自然科学基金81573173、81473008、81673203;江苏省高校基金16KJB330009资助的课题;the National Natural Science Foundation of ChinaGrant 81573173,81473008,81673203;the University Science Research Project of Jiangsu ProvinceGrant 16KJB330009

在线出版日期：2017-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1188-1195