EGFP-LC3稳定细胞系的建立及对Aβ自噬效应的研究
该文建立了稳定表达EGFP-LC3的HEK293细胞系,以10 μmol/L的Aβ肽及其不同疏水性氨基酸含量的截短形式处理细胞24 h,计数LC3的荧光斑点数;Western blot检测LC3B表达量的变化;MTT检测特定Aβ诱导细胞自噬后对细胞活性的差异;用透射电镜确认自噬体的细胞超微结构.结果显示,G418(700 μg/mL)筛选6周后,建立了稳定表达EGFP-LC3的HEK293细胞系;Aβ25-35、Aβ40和Aβ42诱导细胞内LC3荧光斑点的效果较明显;Western blot结果显示LC3B的酯化,即LC3BI向LC3BII转变;MTT检测发现,与Aβ40相比,Aβ42处理后伴随自噬的细胞毒性更强;电镜可以见到Aβ诱导的自噬小体.提示,Aβ肽及其截短的疏水性片段均可诱导自噬,且诱导自噬的效果与疏水性氨基酸含量无关;同时,Aβ42细胞损伤强于Aβ40.该研究为进一步探讨AD自噬机制提供了实验基础.
β-淀粉样肽(Aβ)、自噬、阿尔茨海默病(AD)、微管相关蛋白轻链3(MAPLC3、LC3)、自噬小体
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国家自然科学基金批准号:81100809、81271417和北京市自然科学基金批准号:7152090资助的课题 This work was supported by the National Natural Science Foundation of China Grant No.81100809,81271417 and the Beijing Natural Science Foundation Grant No.7152090
2015-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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