建立高效表达猪LIF的猪胚胎成纤维细胞系
该文目的是建立高效表达重组猪白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)的猪胚胎成纤维细胞(porcine embryonic fibroblasts,PEF)系PEF-pLIF,为下一步辅助建立和培养猪na(i)ve胚胎干细胞奠定基础.以猪胚胎成纤维细胞的总RNA为模板,利用RT-PCR的方法扩增猪白血病抑制因子基因(LIF),将LIF cDNA连接到真核表达载体pCAGDNA3的启动子下游,构建LIF基因真核表达载体pCAGDNA3-pLIF;利用核转染的方法将pCAGDNA3-pLIF质粒转入PEF;对转染细胞进行G418筛选,得到稳定高效表达重组猪LIF的PEF-pLIF;利用RT-PCR、Western blot鉴定PEF-pLIF中LIF基因及LIF表达情况;使用PEF-pLIF细胞作为饲养层培养小鼠胚胎干细胞,通过对小鼠胚胎干细胞进行碱性磷酸酶染色及细胞免疫荧光染色,对PEF-pLIF维持干细胞干性功能进行初步验证.实验结果显示,成功构建了真核表达载体pCAGDNA3-pLIF;并将其成功转入PEF中,获得高效表达重组猪LIF的PEF-pLIF;以PEF-pLIF作为饲养层成功培养克隆形态正常的小鼠胚胎干细胞.该研究表明,稳定高效表达重组猪LIF蛋白的猪胚胎成纤维细胞系PEF-pLIF可作为饲养层维持小鼠胚胎干细胞的未分化状态,可为下一步建立及培养猪na(i)ve胚胎干细胞提供条件.
猪白血病抑制因子、猪胚胎成纤维细胞、饲养层细胞、小鼠胚胎干细胞
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国家自然科学基金面上项目批准号:31371487和江苏高等学校协同创新计划“心血管病转化医学协同创新中心”资助的课题 This work was supported by the National Natural Science Foundation of China Grant No.31371487 and the Collaborative Innovation Center for Cardiovascular Disease Translational Medicine of Jiangsu Province
2015-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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